WB實(shí)驗(yàn)基本原理

　　WB 是進(jìn)行蛋白質(zhì)分析流行和成熟的技術(shù)之一，全稱為蛋白質(zhì)免疫印跡，那么你知道WB實(shí)驗(yàn)的基本原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　WB的由來
 

　　1975年，英國人Edwin Mellor Southern發(fā)明了基因組DNA特定序列定位的方法：
 

　　將待測定DNA分子從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)移到一定的固相支持物硝酸纖維素膜(NC膜)上，即印跡(blotting)，然后膜上的核酸與同位素標(biāo)記的探針在一定的溫度和離子強(qiáng)度下雜交，檢測特定DNA片段，并將這種方法命名為Southern印跡法；后來Alwine又用類似方法檢測RNA，正好與DNA相對(duì)應(yīng)，故被稱為Northern印跡雜交；1981年Burette成功將對(duì)單向電泳分離后的蛋白質(zhì)分子轉(zhuǎn)印到膜上并進(jìn)行免疫學(xué)分析(如抗體抗原特異性結(jié)合)，這種印跡分析稱為Western印跡法；而Eastern blotting是Western blotting的變形，只是檢測對(duì)象變成了雙向電泳后的蛋白質(zhì)分子(所謂的雙向電泳是等電聚焦-聚丙烯酰胺凝膠電泳(IEF-PAGE)分離蛋白質(zhì))。
 

　　WB實(shí)驗(yàn)是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)將混合蛋白質(zhì)樣品分離后，利用特殊虹吸或電場裝置印跡至與相對(duì)應(yīng)的第一抗體特異性結(jié)合，之后再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體相結(jié)合，最終通過底物顯色或放射自顯影來檢測特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。Western Blotting先使用PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)電泳分離出待檢測的蛋白質(zhì)，再用電場裝置印跡至固相介質(zhì)(如PVDF膜)上，固相介質(zhì)以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及生物學(xué)活性不變。再以膜上的蛋白質(zhì)片段作為抗原，與一抗(“探針”)特異性結(jié)合起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記標(biāo)記的二抗結(jié)合，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。
 

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