從有限的細(xì)胞中提取 RNA 實驗

材料與儀器

LCM 帽子
乙醇 糖原 RNA 提取試劑盒 超純水
移液器

步驟

一、材料
1. 緩沖液、試劑和溶液
75% 乙醇 (超純水配制）
糖原，5 mg/ml(Ambion，Austin，TX)
StratageneRNA 提取試劑盒（200345，StratageneCloningSystems，LaJolla,CA)，
包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿：異戊醇、
2mol/L 乙酸鈉、異丙醇?；蛘呤褂?nbsp;PicoPureRNA 分離試劑盒（KIT0202，Arcturus，
MountainView,CA)
DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories，Houston，TX)(4°C 儲存）
2. 特殊設(shè)備
移液器
無 RNA 酶的 1.5 ml 管子
3. 細(xì)胞和組織
來自方案 3 的 LCM 帽子
二、方法
1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。
2. 將 LCM 帽子插入管子，渦旋 5s。
3. 倒置管子孵育 5 min。
4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個月。
5. 將溶液轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 管子中。
6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉，溫和混勻。
7. 加入 220ul 水飽和的酚（底層），溫和混勻。
8. 加入 60ul 氯仿：異戊醇，劇烈晃動。
9. 放于冰上 15 min。
10.14000r/min4°C 離心 30 min。
11. 吸上層溶液到新管子中。
12. 加入 2ul 糖原（最終濃度 10~150ug/ml)。
13. 加入 200ul 冷異丙醇。
14.-80°C 過夜。

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