Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟(6孔板)

一、Lipo 2000介紹

賽默飛Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多功能轉(zhuǎn)染試劑，經(jīng)證明可以將各種有效載荷有效地轉(zhuǎn)染到各種貼壁和懸浮細胞系中。

二、Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟

1.轉(zhuǎn)染前一天，胰酶消化細胞并計數(shù)，細胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90-95%。細胞鋪板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中.2.對于每孔細胞，使用250 u無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋4.0ugDNA，輕輕混勻。

3.使用前將Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻，用250 u無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEM|培養(yǎng)基)稀釋10 ul Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。Lipo 2000稀釋后，在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE:若使用DMEM培養(yǎng)基，則需在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。

4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipo 2000(第三步)。室溫放置20分鐘。

5.(optional)將6孔板中的舊營養(yǎng)液吸出，用無血清培養(yǎng)基清洗兩次。加入2 ml無血清配養(yǎng)基。

6.直接將復合物加入到每孔中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。

7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉復合物或更換培養(yǎng)基。或者在4-5小時后更換培養(yǎng)生長基也不會降低轉(zhuǎn)染活性，

8.在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩(wěn)定表達，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。貼壁細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:

轉(zhuǎn)染后24小時，將細胞以z1:10的比例傳代至新鮮培養(yǎng)基中，次日加入選擇性培養(yǎng)基。

三、Lipo2000購買渠道

賽默飛代理——天津益元利康生物科技有限公司，公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向，專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售。