三一造血STEMERY——人 γδT 細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒說明書

一、產(chǎn)品介紹 

【中文名稱】人 γδT 細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒 

【英文名稱】Human γδT cell robust expasion kit 

【編號】 CT-004 

【包裝規(guī)格】 2L/套

【試劑盒組成】

【預(yù)期用途】

適用于從人新鮮外周血、濃縮白細(xì)胞來源的單個(gè)核細(xì)胞以及凍存的單個(gè)核細(xì)胞在體外擴(kuò)增成 γδT 細(xì)胞。

【貯藏條件與有效期】GD-I，GD-II，GD-IV 置于 2-8°C 保存，有效期為 12 個(gè)月；GD-III 置于-20°C 保存， 有效期為 24 個(gè)月，置于 2-8°C 保存，有效期則為 3 個(gè)月，并勿反復(fù)凍融； 生產(chǎn)日期，有效期至：見標(biāo)簽。

【產(chǎn)品特性】 γδT 細(xì)胞具有在體內(nèi)快速反應(yīng)的特性，在受到刺激時(shí)，會先于 αβ-T 細(xì)胞釋放促炎性細(xì)胞因子 （IFN-γ 和 TNF-α 等）。γδT 細(xì)胞能夠激活 NK 細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞毒作用，與 DC 細(xì)胞互刺激成熟， APC 細(xì)胞抗原呈遞的功能，激活 αβ-T 細(xì)胞的免疫效應(yīng)，γδT 細(xì)胞的殺傷作用具有非 MHC 限制性， 廣泛的殺瘤譜，已知對至少十幾種腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。 γδT 細(xì)胞在人外周血含量很少（1-5%），本產(chǎn)品能夠?qū)⑼庵苎械膯蝹€(gè)核細(xì)胞大規(guī)模擴(kuò)增成 γδT 細(xì)胞，具有擴(kuò)增效率高，目的細(xì)胞百分比高的特點(diǎn)，起始單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)過 14 天培養(yǎng)，總細(xì)胞 數(shù)可以擴(kuò)增約 30±10 倍左右，γδT 細(xì)胞其純度可達(dá) 80%左右，并且全程無血清培養(yǎng)為基礎(chǔ)和臨床 研究使用 γδT 細(xì)胞提供一個(gè)有力的產(chǎn)品。

二、操作步驟

1. 第 0 天，將制備好的單個(gè)核細(xì)胞（MNC）按 1.5-2.0M cells/mL 細(xì)胞密度鋪于 T-75 瓶中，加 入 GD-IV 培養(yǎng)基 45mL，GD-I 500μL，GD-II 100 μL，GD-III 5mL 以及濃度為 100 萬 IU/mL 的 IL-2 50μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）； 注意：

1）IL-2 使用 1mL GD-IV 培養(yǎng)基溶解（IL-2 溶解后濃度為 100 萬 IU/mL），存于 2-8°C 冰箱， 存放時(shí)間不超過兩周。建議將 IL-2 溶解后分裝于無菌試劑管后保存于-20°C 冰箱，使用時(shí)溶解 即可，注意不要反復(fù)凍融，且不可使用長期置于 2-8°C 的 IL-2，否則將嚴(yán)重影響本試劑盒的擴(kuò) 增效果；

2）請勿將 GD-III 從-20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中，GD-III 溶解wan全后，輕輕搖晃瓶 身，使其溫度與成份均一，搖晃時(shí)，請小心避免氣泡產(chǎn)生；

  3）在細(xì)胞鋪加后與第 3 天補(bǔ)液之前的這段時(shí)間內(nèi)，盡可能不要移動(dòng)培養(yǎng)瓶，以免使其受到溫度 變動(dòng)，震蕩等物理因素的干擾。

2. 第 3 天（3×24h），補(bǔ)加 95ml GD-IV 培養(yǎng)基，GD-III 5mL，IL-2 100μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)袋，此時(shí)袋子含 150mL 培養(yǎng)液； 注意：為使更多的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到培養(yǎng)袋中，可先將 T-75 瓶中的細(xì)胞吹打均勻，全部轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中， 再用部分新鮮配制的培養(yǎng)液潤洗培養(yǎng)瓶，并再次轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中，最后補(bǔ)齊培養(yǎng)液即可；

3. 第 5 天，往培養(yǎng)袋補(bǔ)加 150mL GD-IV 培養(yǎng)基，GD-III 7.5mL，IL-2 150μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL），此時(shí)袋子含 300mL 培養(yǎng)液；

4. 第 7 天，往培養(yǎng)袋補(bǔ)加 300mL GD-IV 培養(yǎng)基，剩余的 GD-III，IL-2 300μL（即 IL-2 終濃度 為 1000IU/mL），然后分成兩袋，此時(shí)每個(gè)袋子含 300mL 培養(yǎng)液；

5. 第 9 天，分別往培養(yǎng)袋補(bǔ)加 300ml GD-IV 培養(yǎng)基，IL-2 300μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）， 此時(shí)袋子含 1100mL 培養(yǎng)液； 注意：D5-9 為細(xì)胞增殖高峰期，補(bǔ)液時(shí)注意根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)和密度添加培養(yǎng)基以保持細(xì)胞良 好生長狀態(tài)。

6.第 11 天，分別往每個(gè)培養(yǎng)袋補(bǔ)加 400mL GD-IV 培養(yǎng)基，IL-400μL（即 IL-2 終濃度 1000IU/mL） 

7.第 13-14 天，收獲目的細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

1）在使用本試劑盒時(shí)，可先將 GD-I 與 GD-II 試劑管低速離心（如 1000g/min 離心 1min 等）， 確保試劑足量；

2）由于樣本之間的差異性，在按上述操作說明操作時(shí)，可根據(jù)具體細(xì)胞生長狀態(tài)，調(diào)整補(bǔ)液時(shí) 間；

  3）在使用本試劑盒時(shí)，由于樣本之間的差異性，每個(gè)樣本的細(xì)胞長速與誘導(dǎo)率存在差異。

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