DNA轉染有何注意事項？

轉染是生物學實驗中常用的實驗技術，那么你知道DNA轉染有何注意事項嗎？讓我們一起來看看吧！

一、質粒DNA轉染注意事項

1. 啟動子的選擇

啟動子的選擇對于轉染基因的有效表達是非常重要的。對于轉染過程本身雖然無甚影響，但是對轉染結果卻有著微妙的影響。

2. 質粒的大小和質量

線性化還是超螺旋會影響轉染結果：超螺旋質粒的轉染效率比線性DNA高得多，特別是瞬時轉染。而線性化DNA轉染的整合幾率高。質粒太大了轉染會困難一些。畢竟，相對致密、較小的外源異物被細胞內吞的幾率要大一些。如果你的質粒正好比較大，又沒有經驗，選擇特別注明可以轉大質粒的轉染試劑成功幾率會高一些。有的轉染試劑還會提供一些促進DNA凝聚的成分，使得DNA形成轉染復合物時更致密一些，更容易轉染一些。純化質粒的質量也會影響轉染效率，一定要選擇高質量的質粒。

3. 質粒DNA的濃度和量

既然質粒純化已經不成問題，初學者通常都不會在乎甚至愿意多加點DNA，但是要注意的是，DNA量過少固然轉染效率不高，DNA量過多同樣會降低轉染效率。所以預實驗需要按照說明書的要求，按一定比例混合適量的質粒DNA和轉染試劑。有的轉染試劑要求DNA的量多些，有的轉染試劑效率高只要很少DNA。

4. 轉染試劑的選擇

在確定了質粒的質量之后，就要考慮轉染試劑的選擇了。目前大多數用的是脂質體類的轉染試劑，但這類試劑的毒性較大，轉染效率低，最好選擇非脂質體的轉染試劑，如Entranster試劑。

二、細胞DNA轉染注意事項

1. 優(yōu)化條件

質粒不同，所轉染的細胞不同及定量的準確性等因素會導致在一些情況下所做的轉染不在該優(yōu)化條件內。這種情況下需要對質粒轉染試劑的配比進行優(yōu)化。另外，可選用更合適的轉染試劑，如Entranster試劑。

2. 抑制劑

不要在用于制備DNA-轉染試劑復合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素，透明質酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。

3. 細胞狀態(tài)及融合度

長勢旺盛的細胞轉染效果更佳，細胞密度應該在轉染時融合度至少70%以上。

4. DNA純度及數量

確保質粒OD值A260/A280在1.8~2.0之間。DNA量不能太高，單獨DNA也會對細胞生長有一個基礎的影響。

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