用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，F(xiàn)C抗體有哪些區(qū)別？

用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，F(xiàn)C實(shí)驗(yàn)的抗體有哪些區(qū)別？今天我們一起學(xué)習(xí)一下吧！

WB（western blot，蛋白質(zhì)印跡）：是生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)中一種非常常見的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其原理是先利用SDS-PAGE將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，接著將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后再利用抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測(cè)。通過分析條帶大小和顯色信號(hào)獲得目標(biāo)蛋白質(zhì)在細(xì)胞或組織樣本中的表達(dá)情況。在實(shí)驗(yàn)過程中由于蛋白質(zhì)在電泳前進(jìn)行了加熱變性，破壞了保持蛋白質(zhì)二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的氫鍵，從而使得蛋白質(zhì)發(fā)生了線性化，需要使用識(shí)別線性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般選用人工合成多肽作為抗原制備出來的抗體。

IHC(immunohistochemical，免疫組化)：是通過抗原抗體特異性免疫反應(yīng)和化學(xué)/熒光呈色反應(yīng)，利用標(biāo)記抗體對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原進(jìn)行研究的技術(shù)。在進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)過程中需要將組織或者細(xì)胞進(jìn)行固定，以維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和天然狀態(tài)下的一致，確保組織細(xì)胞抗原特異性的穩(wěn)定。但化學(xué)物質(zhì)的固定會(huì)使蛋白質(zhì)變性，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)會(huì)存在有一定的區(qū)別，而又不同于WB中加熱變性變成線性的結(jié)構(gòu)。

免疫組化抗體識(shí)別的是未經(jīng)加熱變性處理的抗原表位，有的屬于構(gòu)象型，有的屬于線性的，構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，加熱變性會(huì)消失，而線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有。因此在做IHC/IF實(shí)驗(yàn)中，最合適是用重組蛋白作為抗原制備出來的抗體，除此之外也可以是人工合成多肽作為抗原制備出來的抗體。如果所用的抗體識(shí)別的是線性表位(例如識(shí)別蛋白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸)那么這種抗體則可以同時(shí)用于IHC和WB，而如果抗體識(shí)別的是構(gòu)象表位，則只能用于IHC。

IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：是通過抗原抗體特異性反應(yīng)來純化富集樣品中的目的蛋白的一種方法。一般情況下是使目的蛋白與其對(duì)應(yīng)的抗體(protein A/G)形成免疫復(fù)合物沉淀而被收集。根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)的不同可以將IP技術(shù)分為以下3種：CHIP、RIP、Co-lP。CHIP是利用IP技術(shù)富集蛋白后檢測(cè)與其結(jié)合的DNA的量；RIP是檢測(cè)與其結(jié)合的RNA的量；Co-IP則是檢測(cè)與其結(jié)合的蛋白質(zhì)的量。

免疫沉淀是用抗體去識(shí)別結(jié)合自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此做IP實(shí)驗(yàn)時(shí)抗體最好選擇由天然蛋白作為抗原制備出來的抗體，當(dāng)然也可以選擇由重組蛋白作為抗原制備的抗體，注意最好不要選擇由人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因?yàn)檫@種抗體識(shí)別的位點(diǎn)有可能包裹在蛋白內(nèi)部而無法識(shí)別。

FC(flowcytometry，流式細(xì)胞術(shù))：是以IF為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一種專門的細(xì)胞分析技術(shù)，主要用于細(xì)胞的分選。流式細(xì)胞中分為兩種，一種是將細(xì)胞固定之后的流式，在選用抗體時(shí)保持與IF/IHC 一致即可；另外一種是活細(xì)胞的流式，這種流式最好采用由重組蛋白作為抗原制備出來的抗體或者采用由天然蛋白作為抗原制備的抗體。

在做流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中由兩種標(biāo)記方法，直接標(biāo)記法和間接標(biāo)記法。使用直接標(biāo)記法時(shí)應(yīng)選擇帶有熒光標(biāo)記的一抗；如果研究的蛋白沒有直接標(biāo)記的一抗，則需使用間接標(biāo)記法，在使用間接標(biāo)記法的過程中需注意要同時(shí)使用可識(shí)別靶標(biāo)抗原一抗和偶聯(lián)熒光染色的二抗。

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