猴痘病毒檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果和判定標(biāo)準(zhǔn)

　　猴痘病毒檢測(cè)試劑盒的組合物由一個(gè)引物對(duì)和一個(gè)探針組成：引物對(duì)由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成：探針的序列為序列表中序列3。利用本發(fā)明所提供的NASBA試劑盒對(duì)猴痘病毒進(jìn)行檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)便，快速、特異的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明可快速篩查猴痘病毒，對(duì)口岸輸入性疾病篩查具有重要意義，為防御疾病的傳入做好技術(shù)支撐和戰(zhàn)略?xún)?chǔ)備，滿(mǎn)足當(dāng)前衛(wèi)生檢疫的需求。
 

　　猴痘病毒檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果和判定標(biāo)準(zhǔn)：
 

　　試驗(yàn)結(jié)果成立的條件：陽(yáng)性對(duì)照PCR反應(yīng)產(chǎn)物電泳后在301bp的位置上出現(xiàn)特異性條帶；陰性對(duì)照PCR產(chǎn)物電泳后沒(méi)有條帶，試驗(yàn)結(jié)果成立，否則結(jié)果不成立。
 

　　結(jié)果判斷：在試驗(yàn)結(jié)果成立的前提下，如果樣品PCR反應(yīng)有特異性的條帶，則樣品為陽(yáng)性；反之，為陰性。
 

　　猴痘病毒檢測(cè)試劑盒性能檢測(cè)：
 

　　1.PCR檢測(cè)試劑盒的重復(fù)性檢測(cè)對(duì)同一批提取的猴痘病毒陽(yáng)性模板進(jìn)行10次PCR擴(kuò)增，觀察試劑盒對(duì)同一批次陽(yáng)性模板擴(kuò)增的結(jié)果。對(duì)10批提取的猴痘病毒陽(yáng)性模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，觀察試劑盒對(duì)不同批次提取的陽(yáng)性模板擴(kuò)增的結(jié)果。
 

　　2.PCR檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性檢測(cè)用配制好的檢測(cè)試劑盒分裝后保存在-20℃冰箱中，每隔7d對(duì)陽(yáng)性模板進(jìn)行PCR檢測(cè)，連續(xù)檢測(cè)6個(gè)月，觀察試劑盒在-20℃保存的穩(wěn)定性。用配制好的PCR反應(yīng)混合物分裝后分別保存在4℃冰箱或室溫中，每隔12h對(duì)陽(yáng)性模板進(jìn)行PCR檢測(cè)，連續(xù)檢測(cè)4d，觀察試劑盒在室溫或4℃保存的穩(wěn)定性。用配制好的PCR反應(yīng)混合物分裝后保存在-20℃冰箱后，分別凍融1~10次后，對(duì)陽(yáng)性模板進(jìn)行PCR檢測(cè)，觀察凍融次數(shù)對(duì)試劑盒的影響。